沙眼衣原體的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病原學(xué)方法和非病原學(xué)方法。病原學(xué)方法包括衣原體直接鏡檢、衣原體培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)（ 免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和直接免疫熒光法）、衣原體核酸檢測(cè)（包括核酸探針雜交和PCR）；非病原學(xué)方法包括衣原體抗體檢測(cè)（用 衣原體抗原檢測(cè)血中特異的衣原體抗體）、組織病理和尿白細(xì)胞計(jì)數(shù)。本篇內(nèi)容主要介紹標(biāo)本直接檢查。
一、直接顯微鏡檢查
1、Giemsa染色或碘染色
Giemsa染色或碘染色臨床標(biāo)本的衣原體直接鏡檢C.t可在敏感細(xì)胞中增殖，在細(xì)胞中形成包涵體。用拭子搽落或白金耳刮落含有 包涵體的黏膜細(xì)胞直接涂片，做Giemsa染色或碘染色，如發(fā)現(xiàn)有一定數(shù)量的具有特征性的包涵體則可作出診斷。
此法簡(jiǎn)便易行，但僅適用于新生兒眼結(jié)膜炎刮片的檢查，對(duì)泌尿生殖道沙眼衣原體感染的診斷不夠敏感，一般不直接應(yīng)用于臨 床標(biāo)本的檢測(cè)。
2、直接免疫熒光試驗(yàn)（DIF）
已有15種血清型的衣原體主要外膜蛋白制成單克隆抗體，并用熒光素做標(biāo)記。當(dāng)標(biāo)本中存在衣原體時(shí)，針對(duì)沙眼衣原體主要外 膜蛋白或脂多糖的單克隆抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合，單克隆抗體標(biāo)有熒光素，在熒光顯微鏡下，陽性者可見到亮蘋果綠的原體和始體。
此法診斷沙眼衣原體感染的敏感性為70%～90%，特異性為83%～99%。30～40分鐘即可出結(jié)果。標(biāo)本的貯存和運(yùn)送方便，標(biāo)本中 的沙眼衣原體不必是存活的或是有感染性的。由于已經(jīng)有商品化的試劑盒供應(yīng)，方便了使用。因而有些實(shí)驗(yàn)室將它和衣原體培養(yǎng)并列為 擴(kuò)大的“金標(biāo)準(zhǔn)”。缺點(diǎn)是在低感染率的人群中敏感性差，受實(shí)驗(yàn)人員的主觀影響大。
它最適宜用來檢測(cè)沙眼衣原體高流行率人群（如性病門診患者）。
二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
先將處理過的固相載體（微孔或珠子）和標(biāo)本一起孵育，如標(biāo)本中含有衣原體，即可吸附于固相載體上。把未結(jié)合的物質(zhì)洗去 后，再將固相載體與抗衣原體抗體結(jié)合，然后再加入含有辣根過氧化物酶的抗體（二抗），二抗能與固相載體上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生 反應(yīng)。然后再加入底物和鄰苯二胺溶液，酶能將其氧化成桔黃色，顏色的深淺和抗原的量成正比，顏色可用酶標(biāo)儀測(cè)出，當(dāng)標(biāo)本的吸收 值大于或等于閾值時(shí)則視標(biāo)本中含有C.t。
此法的一個(gè)顯著優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化程度高，可同時(shí)檢測(cè)大批量標(biāo)本，敏感性較高（67%～90%），特異性強(qiáng)（92%～97%），陽性預(yù)期 值基本可靠（32%～87%）。用儀器判定結(jié)果，結(jié)果較為客觀。
最適宜用來檢測(cè)沙眼衣原體高流行率人群。在低流行率的人群中應(yīng)用時(shí)，解釋結(jié)果宜慎重。
三、膠體金免疫沉淀法 該法是將附有衣原體單抗的乳膠顆粒（膠體金）復(fù)合物吸附于濾紙上，將濾紙夾在兩塊塑料板中間。如加入的標(biāo)本中含有衣原體抗原， 則標(biāo)本中的抗原與結(jié)合有乳膠（膠體金）的單抗結(jié)合。復(fù)合物由于毛細(xì)作用向前擴(kuò)散移動(dòng)，在結(jié)果窗中與二抗結(jié)合作用出現(xiàn)一條紅線， 標(biāo)本即為陽性。
本試驗(yàn)敏感性為87%，特異性為98.8%。試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，出結(jié)果快。但敏感性較差，標(biāo)本需要有一定量的抗原，抗原含量低時(shí)可 出現(xiàn)假陰性。
四、分子生物學(xué)方法 近年來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，許多分子生物學(xué)診斷方法相繼出現(xiàn)，核酸雜交（核酸印跡法、斑點(diǎn)印跡法和組織原位雜交法等） 特別是核酸擴(kuò)增試驗(yàn)已不斷用于衣原體的診斷。
1、核酸雜交
核酸雜交是最早用于衣原體診斷的分子生物學(xué)方法，其基本原理是具有一定同源性的二條核酸單鏈在一定條件下（適當(dāng)?shù)臏囟?和離子濃度等）按堿基互補(bǔ)的原則形成雙鏈。雜交過程高度特異，雜交的雙方是探針和待檢核酸，待檢核酸是衣原體特異的基因或質(zhì)粒 DNA，探針用放射性同位素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記，以利于信號(hào)的檢測(cè)。根據(jù)C.t染色體和質(zhì)粒的DNA序列設(shè)計(jì)DNA探針。
目前已有診斷衣原體的商品化探針試劑盒，它是利用標(biāo)記有熒光素吖啶橙的單鏈 DNA 來檢測(cè)靶衣原體中的rDNA。當(dāng)形成一定的 RNA-DNA復(fù)合物后，通過化學(xué)發(fā)光儀讀出結(jié)果，敏感性和特異性分別為70%～92%和97%～98%。
2、核酸擴(kuò)增
核酸擴(kuò)增試驗(yàn)是繼核酸雜交試驗(yàn)之后又一個(gè)重要的檢測(cè)手段。試驗(yàn)通過對(duì)特定對(duì)象（靶DNA）的擴(kuò)增放大，使檢測(cè)的敏感性大大 提高。
目前使用最廣泛的是聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。測(cè)定衣原體DNA，敏感性80%～92%，特異性99%（男性患者尿道標(biāo)本和生殖道標(biāo)本無 差別，女性尿道標(biāo)本的敏感性較陰道標(biāo)本低）。用于診斷沙眼衣原體感染的PCR法已有商品化試劑盒。
PCR法診斷泌尿生殖道沙眼衣原體感染的敏感性高，在細(xì)胞培養(yǎng)陰性者亦能檢測(cè)出沙眼衣原體感染。一種PCR（以質(zhì)粒DNA順序?yàn)?引物）陽性而培養(yǎng)陰性的標(biāo)本可以用另一種PCR（以不同的質(zhì)粒DNA順序或主要外膜蛋白基因順序?yàn)橐铮┳C實(shí)，說明可能并非是PCR假 陽性結(jié)果。然而，也有報(bào)告由于“殘留”污染而造成PCR假陽性，或因標(biāo)本中含有Taq酶抑制物質(zhì)而使PCR呈假陰性。在PCR反應(yīng)體系中加 入內(nèi)參照可以發(fā)現(xiàn)假陰性問題，此時(shí)可將標(biāo)本以反復(fù)凍融幾次或凍存較長(zhǎng)時(shí)間或稀釋等方法來解決。
臨床上，PCR的結(jié)果應(yīng)該結(jié)合病史和治療情況進(jìn)行分析，必要時(shí)重復(fù)取材或在另一部位取材作試驗(yàn)。沙眼衣原體核酸擴(kuò)增技術(shù)的 另一進(jìn)展是可用清晨首次尿（或禁尿4小時(shí)后的首次尿）作為標(biāo)本。美國(guó)2015年性傳播疾病診療指南中，沙眼衣原體的診斷提到的 方法就是NAATs，并且提到了清晨首次尿同樣可以用于沙眼衣原體感染的診斷。由于尿液取材方便，對(duì)患者無侵害，因此這種方法適合 于在不同人群中進(jìn)行大規(guī)模篩查，也適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)標(biāo)本采集后運(yùn)送至中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。
PCR檢測(cè)技術(shù)在衣原體感染中的應(yīng)用前景是：C.t 泌尿生殖道感染的早期診斷，尤其適用于無癥狀攜帶者或輕癥患者的診斷；做 衣原體感染的分子流行病學(xué)調(diào)查，為性傳播疾病的監(jiān)測(cè)提供依據(jù)。
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